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目前ELISA法仍在研究當中占有著主流地位,ELISA試劑盒的普遍應用使得實驗更加方便、經(jīng)濟和準確,ELISPOT技術(shù)的優(yōu)點也決定了它的發(fā)展?jié)摿?。LISPOT法來源于ELISA,相比較傳統(tǒng)的ELISA法有所突破,是定量ELISA技術(shù)的延伸和發(fā)展。由于游離的循環(huán)抗體或CK的半哀期不同,使之在體液中不斷的被代謝或與靶器官結(jié)合,傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)不能確切的反映體內(nèi)的抗體及CK的水平。80年代,國外的科研工作者根據(jù)ELISA技術(shù)的基本原理,建立了體外檢測特異性抗體分泌細胞和CK分泌細胞的固相酶聯(lián)免疫斑點技術(shù)(ELISPOT)。
ELISA試劑盒實驗過程中遇到的各種疑問:
1,水質(zhì)原因:點復溶液驗證,用娃哈哈礦泉水代替
2,實驗操作原因
吸取到其它相吹干,準確的取液吹干
離心不*,延長離心時間
樣本的污染,更換樣本
乳化未處理*,溫浴(70℃)處理乳化現(xiàn)象
3,儀器試劑原因
離心管未清洗干凈,正確的洗滌器具
有機溶劑的影響,ELISA試劑盒做試劑空白看影響結(jié)果
4,衍生化試劑原因(長時間衍生化試劑變質(zhì)),更換衍生化試劑
5,與曲線好壞相關(guān),,保證曲線的正常
ELISA試劑盒回收率
1.空白管陽性高
樣本本身就是陽性樣本,換陰性樣本做回收率
空白管在實驗中被污染,實驗中防止交叉污染
水質(zhì)原因用,娃哈哈礦泉水代替
2.偏 高
添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量多,準確的取液吹干
取到其它相層液體,取需用相吹干
復溶液未稀釋或加入量少,正確的稀釋復溶液
3.偏 低
添加量不準確,的添加量
添加濃度不適合,添加合適的濃度
取液吹干量少,準確的取液吹干
復溶液稀釋錯誤或加入量多,正確的稀釋復溶液