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    七夕前夕,ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)為你節(jié)約時(shí)間和她約會(huì)吧!

    發(fā)布時(shí)間: 2014-07-21  點(diǎn)擊次數(shù): 847次


    ELISA試劑盒
    是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA).已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。先將生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育。洗滌后,加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時(shí)作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

    如何縮小ELISA實(shí)驗(yàn)中的誤差呢?

    要從自然因素(試劑穩(wěn)定性、準(zhǔn)確率、儀器精密度)和人為因素(操作者)兩個(gè)方面入手:

    (1)檢驗(yàn)技師應(yīng)具備從事實(shí)驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。能熟練操作實(shí)驗(yàn)儀器、器械,具有一定總結(jié)和分析問(wèn)題的能力,對(duì)實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的意外情況能及時(shí)妥善解決。

    (2)使用校對(duì)過(guò)的微量移液器,排除自然誤差。移液器準(zhǔn)確與否對(duì)定量檢測(cè)尤為重要。

    (3) 評(píng)估試劑的實(shí)用性。試劑的穩(wěn)定與否,對(duì)準(zhǔn)確率的高低到頭重要。在試劑啟用前,應(yīng)進(jìn)行陰、陽(yáng)對(duì)照及樣品反復(fù)比照試驗(yàn),判定試劑符合要求后方可使用。

     (4)操作前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書。嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求進(jìn)行規(guī)范化操作。不同批號(hào)的試劑不可混用。值得改進(jìn)的地方,反復(fù)試驗(yàn)確定成立后才能改進(jìn),比如洗板次數(shù)的掌握等。

    (5) 加樣要準(zhǔn)確、快速。化學(xué)理論表明,生成物的量與反應(yīng)物的量成正相關(guān)。加樣不準(zhǔn)確,酶生成物的量不能確定,直接影響顯色結(jié)果。另外,顯色的深淺及A值的測(cè)定與加入顯色劑和終止液的量有關(guān),所以加樣應(yīng)慎重。要求在一定時(shí)間內(nèi)加樣完畢的實(shí)驗(yàn),如果加樣遲緩,便出現(xiàn)誤差,而且試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露在外,尤其室溫過(guò)高時(shí),保存期會(huì)縮短甚至失效。

    (6)洗滌*。洗板不*,酶結(jié)合物本底顯色會(huì)呈現(xiàn)假陽(yáng)性。另外,洗滌液要新鮮,現(xiàn)用現(xiàn)配,陳舊的洗滌液會(huì)出現(xiàn)本底增高現(xiàn)象,也可能出現(xiàn)假陽(yáng)性。

    (7)嚴(yán)控反應(yīng)時(shí)間。反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),酶失活;反應(yīng)時(shí)間過(guò)短,酶結(jié)合物不能與血清中的微生物抗原抗體充分結(jié)合,生成物結(jié)構(gòu)松散不牢固,容易洗掉,都可能造成假陰性。

    (8)嚴(yán)格掌握顯色時(shí)間。顯色時(shí)間過(guò)短,加入終止液反應(yīng)終止后,底物結(jié)合物的量過(guò)少,易出現(xiàn)假陰性。超過(guò)顯色要求時(shí)間后顯色,應(yīng)判為假陽(yáng)性,這可能與試劑本身有關(guān)。加顯色劑后立即顯色,不可報(bào)陽(yáng)性,這可能是本底顯色的結(jié)果。

     (9)注意試劑保存期,過(guò)保存期的試劑不能使用。

    結(jié)合以上幾點(diǎn),使我們?cè)跒榭蛻魷y(cè)定試劑時(shí)大大提高了結(jié)果的真實(shí)度,及其快捷度,為顧客提供了方便,減少了實(shí)驗(yàn)周期,想要實(shí)驗(yàn)真實(shí)可靠,務(wù)必按照此實(shí)驗(yàn)要素執(zhí)行,方可解決實(shí)驗(yàn)中務(wù)必要的麻煩,為您節(jié)約時(shí)間。

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